總結(jié)使用超濾離心管您可能遇到的問(wèn)題

由于超濾管使用不恰當(dāng)或是超濾知識(shí)缺乏引起的問(wèn)題，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)不順利，經(jīng)常得不到目標(biāo)蛋白，要么就是蛋白損失很大。怎么辦呢？

• 為什么我截留分子量選擇沒(méi)錯(cuò)，蛋白有時(shí)候卻會(huì)漏出在濾出液中？
• 為什么我用濃縮后的蛋白做下游分析的時(shí)候發(fā)現(xiàn)有干擾？
• 用超濾管來(lái)分離兩種蛋白可以嗎？
• 有時(shí)候我用超濾離心管連水都離不下來(lái)，可能的原因是？
• 超濾管可以用來(lái)脫鹽和濃縮核酸嗎？
• 如何給超濾管滅菌？

你是否遇到過(guò)諸如以上問(wèn)題？

別著急，小編為您總結(jié)以上問(wèn)題的解決方法?。?/span>

1、為什么我截留分子量選擇沒(méi)錯(cuò)，蛋白有時(shí)候卻會(huì)漏出在濾出液中？

導(dǎo)致漏蛋白甚至檢測(cè)不到蛋白的原因很復(fù)雜，應(yīng)優(yōu)先根據(jù)樣品調(diào)整工藝，因?yàn)橥环N膜、截留分子量和裝置組合對(duì)于不同的蛋白質(zhì)類(lèi)別甚至物種而言可能并非*之選。

在選擇過(guò)程中，應(yīng)首先執(zhí)行以下步驟：
1、考慮樣品和分子特性：比如改變pH 可能增加構(gòu)象改變的風(fēng)險(xiǎn)，而降低溫度可能降低濃縮效率等。
2、選擇正確的膜：*，超濾沒(méi)有太多的膜選項(xiàng)，但您應(yīng)對(duì)再生纖維素（RC）、Hydrosart 和聚醚砜（PES）材料進(jìn)行測(cè)試，以確定哪種材料可為您的特定材料提供z低的非特異性結(jié)合和*的回收率。
3、選擇合適的截留分子量，通常是靶標(biāo)1/3大小的截留分子量z適合。但有時(shí)則需要更小的孔徑來(lái)滿足回收率的要求。如果在病毒和核酸樣品，可參看下面截留分子量和病毒顆粒分子大小以及核酸大小的換算表。
4、選擇合適的裝置：賽多利斯擁有適用于低濃度樣品、DNA、蛋白質(zhì)、病毒、過(guò)濾應(yīng)用等廣泛的裝置選項(xiàng)；選擇合適的裝置可以有效改善結(jié)果。
5、使用合適的裝置處理方法：例如預(yù)沖洗以去除分析物或用非干擾蛋白沖洗以鈍化結(jié)合位點(diǎn)并減少損失。
6、考慮樣品控制方法，例如使用裝置內(nèi)的“死體積”移走所有截留物，或預(yù)灌裝濾液管以控制截留物的z終體積。

2、為什么我用濃縮后的蛋白做下游分析的時(shí)候發(fā)現(xiàn)有干擾？

超過(guò)濾薄膜含有微量甘油和die氮化鈉。如果此材料干擾分析，可用緩沖液或去離子水預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，用 0.1 N NaOH 清洗，然后用緩沖液或去離子水再次清洗后甩干。如果必須用NaOH處理的時(shí)候，推薦試用聚醚砜（PES）膜，因?yàn)楸龋ㄔ偕w維素）RC膜更耐NaOH，同時(shí)提醒NaOH不能過(guò)夜浸泡。

3、用超濾管來(lái)分離兩種蛋白可以嗎？

因?yàn)槌瑸V膜的孔徑不是規(guī)則的結(jié)構(gòu)，所以不能進(jìn)行精確的分離，所以按照經(jīng)驗(yàn)，我們推薦兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)（10倍）以上才可以進(jìn)行分離。另外，賽多利斯的300k，1000k和0.2um的超濾管可以實(shí)現(xiàn)10倍以上分子量差異的蛋白粗分離。

4、有時(shí)候我用超濾離心管連水都離不下來(lái)，可能的原因是什么呢？
超過(guò)濾薄膜含有微量甘油。如果出現(xiàn)這種情況，先用0.1 N NaOH 清洗再離心。z后用緩沖液或去離子水水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應(yīng)立即使用，如暫時(shí)不用，請(qǐng)保持潤(rùn)濕狀態(tài)，避免重新干燥。另外，有些水的水質(zhì)本身雜質(zhì)較多，或是不同水機(jī)對(duì)水的處理效果有差異，這個(gè)時(shí)候可以檢查是否水機(jī)工作正常，然后用 0.2 μm 的針頭濾器過(guò)濾水，然后在進(jìn)行超濾，效果可能會(huì)好很多！

 5、超濾管如何進(jìn)行滅菌？
70 % 乙醇滅菌，不可以用高壓高溫滅菌。所有超濾管都可以用 70 % 乙醇和環(huán)氧乙烷（EtO）處理，以進(jìn)行滅菌。但請(qǐng)注意，尚未對(duì)處理后滅菌進(jìn)行任何研究。對(duì)于DNA 研究，已對(duì)Vivacon® PCR 等級(jí)系列進(jìn)行了EtO 處理，以失活任何干擾的痕量DNA。