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液相色譜儀測定蘋果中的酚類物質(zhì)

閱讀:1325發(fā)布時間:2017-6-21

在蘋果汁加工過程中,酚類物質(zhì)與果汁中的蛋白質(zhì)結(jié)合,形成大分子的聚合物,從而使蘋果汁產(chǎn)生沉淀,影響蘋果汁的產(chǎn)品質(zhì)量。酚類物質(zhì)是果實在生長代謝中的次生產(chǎn)物,它對植物的生長發(fā)育和調(diào) 節(jié)、基因的誘導表達、信號轉(zhuǎn)導、紫外輻射的吸收、果蔬產(chǎn)品的褐變、生物固氮有一定的影響。

實驗利用液相色譜分析酚類物質(zhì),采用反相C18柱,具有快速、操作簡單、分離效果好和同時能將不同酚類物質(zhì)分開等優(yōu)點。

 

儀器設備

LC-600B梯度液相色譜分析儀

 

LC-600B智能全控液相色譜系統(tǒng)由2臺P600B高壓恒流泵、1臺UV600B紫外檢測器與1臺SCL600B系統(tǒng)控制器直接構(gòu)成梯度分析系統(tǒng)。*采用柱塞浮動式安裝方式,增強儀器性能的穩(wěn)定性和使用的持久性??蓮V泛應用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領域。

 

色譜分析條件

色譜柱

Discovery C18柱150mm×4.6mm,Φ5μm

流動相

甲醇和水

柱溫

30℃

流速

1.2mL/min

進樣量

10μL

檢測器

紫外檢測器

波長

280nm

線性梯度洗脫

0~35min 98%甲醇和水;35~65min 68%甲醇和水;65~70min 98%甲醇和水。

 

樣品的制備

(1)分析樣品的制備:蘋果皮5g(或肉10g),加入1mL 6mol/L的HCl,放置于石英砂中研磨;加50mL的蒸餾水用1 mol/L的HCl調(diào)pH至2.0;然后每次加入50mL的乙酸乙酯,萃取兩次,攪拌5min,離心,分離出酯相和水相;將水相用6 mol/L的NaOH調(diào)pH至7.0,每次加入50mL的乙酸乙酯萃取2次,分離出酯相。將酯相在30℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),用N2氣吹干,再用1mL的甲醇定容。

(2)果汁樣品的制備:蘋果汁50.0mL用1 mol/L的HCl調(diào)pH至2.0,然后每次加入50mL的乙酸乙酯萃取兩次,攪拌5min,離心,分離出酯相和水相。酯相和水相的處理方法與分析樣品的制備方法一樣。

 

色譜圖分析:

 酚類物質(zhì)標準樣品的液相色譜圖

1—兒茶酚;   2—兒茶素;      3—綠原酸;     4—表兒茶素;

5—根皮苷;   6—楊梅黃酮;    7—桑色素;     8—槲皮素;

9—柚苷;     10—山*素;     11—芹菜素

 

蘋果果肉酚類物質(zhì)液相色譜圖


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