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高效液相色譜法檢測富*中的硒代蛋氨酶

閱讀:596發(fā)布時間:2020-11-12

   硒是人體必需微量元素,存在于抗氧化酶和甲狀腺素代謝酶的活性中心,缺硒導(dǎo)致克山病,合理補硒可有效減少人類及動物罹患癌癥的風(fēng)險。蛋氨酸中硫被硒取代后得到硒代蛋氨酸,是生物利用度zui高的有機(jī)硒化物,人體吸收后可在體內(nèi)形成硒儲備池。富*是被廣泛研究的食品硒補充劑,在培養(yǎng)基中加入無機(jī)硒,利用酵母將難吸收的無機(jī)硒源轉(zhuǎn)化為易吸收的有機(jī)硒源。將富*納入飲食中作為硒補充劑可減少大約50%的癌癥發(fā)病率與死亡率。作為硒代蛋氨酸的來源,富*中總硒的70%-76%以硒代蛋氨酸的形式存在,富*中硒代蛋氨酸的含量對評價其質(zhì)量與營養(yǎng)價值具有重要意義。

   目前,國外測定富*中硒代蛋氨酸的方法有高效液相色譜串聯(lián)電感耦合等離子體質(zhì)譜法(HPLC-ICP-MS),高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS),毛細(xì)管電泳-電化學(xué)發(fā)光法(CE-ECL)等,國內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)較少。本實驗針對富*中硒代蛋氨酸進(jìn)行分析,采用酶解法進(jìn)行樣品提取,通過對樣品的色譜分離及衍生等條件進(jìn)行研究,建立丹磺酰氯(DNS-CI)柱前衍生高效液相色譜-熒光法測定富*中硒代蛋氨酸。

 儀器準(zhǔn)備

 

儀器簡介

    LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時控制數(shù)臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等,實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。

 

應(yīng)用領(lǐng)域

化合物檢測、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)食品檢測、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析

 

樣品提?。?/span>

稱取0.1g經(jīng)冷凍研磨的富*原料(或0.5g富*產(chǎn)品),置于10mL離心管中,加入5mL0.05mol/L磷酸氫鈉緩沖液(pH=7.4),40mg蛋白酶XIV,充分混勻后于37℃搖床振搖24h。振搖結(jié)束后向樣品酶解液中加入0.1mL1.5g/L亞鐵**化鉀溶液及0.1mL3g/L乙酸鋅溶液,充分混勻后在3000r/min下離心10min,取上清液待測,用80mmol/L碳酸鈉緩沖液(用1mol/LHCI調(diào)節(jié)pH至9.5)適當(dāng)稀釋,使樣品含量在方法線性范圍內(nèi)。

譜條件:

 

色譜柱

Pursuit XRs C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)

檢測器

熒光檢測器

激發(fā)光波長

320nm

發(fā)射波長

523nm

柱溫

30℃

進(jìn)樣量

10μL

流動相

乙腈-10mmol/L*緩沖液(含4%N,N-二甲基甲酰胺pH=6.55)

流速

1.0mL/min

梯度洗脫程序

(T,乙腈%)0min,14%;5min,20%;10min,25%;12min,25.6%;15min,25.7%;19min,25.9%;23min,26.5%;30min,27%;34min,30%;38min,43%;41min,68%;45min,68%;47min,86%;52min,86%

 

 

譜圖分析

 


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