大鼠肺炎病毒（PVM）試劑盒說明書

   本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肺炎病毒（PVM）表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠肺炎病毒（PVM）表達(dá)。用純化的大鼠肺炎病

毒（PVM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中肺炎病毒（PVM）相結(jié)合，經(jīng)洗

滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的肺炎病毒（PVM）抗體結(jié)合，形成抗體

抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化

成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），

與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中大鼠肺炎病毒（PVM）的存在與否。

試劑盒組成

  1  30 倍濃縮洗滌液

  2  酶標(biāo)試劑

  3  酶標(biāo)包被板

  4  樣品稀釋液

  5  顯色劑 A 液

  6  顯色劑 B 液

  標(biāo)本要求

  20ml×1 瓶

  6ml×1 瓶

  12 孔×8 條

  6ml×1 瓶

  6ml×1 瓶

  6ml×1/瓶

  7  終止液

  8  陽(yáng)性對(duì)照

  9  陰性對(duì)照

  10  說明書

  11  封板膜

  12  密封袋

  6ml×1 瓶

  0.5ml×1 瓶

  0.5ml×1 瓶

  1 份

  2 張

  1 個(gè)

  1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

  2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

  1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1

孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

   2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50!l。然后在待測(cè)樣品孔先

加樣品稀釋液 40!l，然后再加待測(cè)樣品 10!l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不

觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

  3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

  4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50!l，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同 3。

  8. 洗滌：操作同 5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50!l，再加入顯色劑 B50!l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

  10 分鐘.

  10. 終止：每孔加終止液 50!l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

  11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;  陰性對(duì)照平均值≤0.10 

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15 

陰性判定：樣品 OD 值<  臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陰性

陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥  臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陽(yáng)性

。

注意事項(xiàng)

  1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。