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Folin-酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)方法

時(shí)間：2017/2/16閱讀：1136

Folin-酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)方法
實(shí)驗(yàn)室較多用用Folin-酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒此法的特點(diǎn)是靈敏度高，較雙縮脲高兩個(gè)數(shù)量級(jí)，較紫外法略高，操作稍微麻煩，反應(yīng)約在15分鐘有zui大顯色，并zui少可穩(wěn)定幾個(gè)小時(shí)，其不足之處是干擾因素較多，有較多種類的物質(zhì)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【原理】
蛋白質(zhì)中含有酚基的，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產(chǎn)生蘭色化合物，顏色深淺與蛋白含量成正比。
【操作】
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：
按下表操作，在試管中分別加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，用生理鹽水補(bǔ)足到1ml。肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒加入5ml的堿性酮試劑，混勻后室溫放置20分鐘后，再加入0.5ml酚試劑混勻。
編號(hào) 1 2 3 4 5 6 蛋白標(biāo)準(zhǔn)（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 堿性酮試劑（ml） 5 5 5 5 5 5 混勻后室溫(25℃)放置20分鐘酚試劑（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分鐘后，以第1管為空白，在650nm波長(zhǎng)比色，讀出吸光度，以各客的標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度為橫坐標(biāo)，以其吸光度為縱坐標(biāo)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2、血清蛋白質(zhì)測(cè)定。
稀釋血清（或其它蛋白樣品濃度）：準(zhǔn)確吸取0.1ml血清，置于50ml容量瓶中，用生理鹽水釋釋至刻度（此為稀釋500倍，其它蛋白樣品酌情而定）。再取三只試管，分別標(biāo)以1、2、3號(hào)，按下表操作：
編號(hào) 測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管稀釋標(biāo)本(ml) 0.2 — — 稀釋標(biāo)準(zhǔn)液(ml) — 0.2 — 0.9%NaCl(ml) — — 0.2 堿性酮液(ml) 1.0 1.0 1.0 混勻后于室溫放置20分鐘酚試劑(ml) 0.1 0.1 0.1
混勻各管，30分鐘后，在波長(zhǎng)650nm比色，讀取吸光度。
【計(jì) 算】
1、以測(cè)定管讀數(shù)查找標(biāo)準(zhǔn)曲線求得血清蛋白含量。
2、無標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒可以與測(cè)定管同樣操作的標(biāo)準(zhǔn)管按下式計(jì)算蛋白含量。

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