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中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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人乳鐵蛋白(hLTF)轉(zhuǎn)基因成分核酸檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素

時(shí)間:2021/10/20閱讀:967
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人乳鐵蛋白(hLTF)轉(zhuǎn)基因成分核酸檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

ANGEL2蛋白抗體

ANKLE2蛋白抗體

特異性錨樣蛋白1抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體

氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成酶6G抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體

丙型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體

芳香基硫酸酯酶K抗體

神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體

錨定蛋白G抗體

肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體

整合素樣金屬蛋白酶與1型抗體

整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗體 (N端抗體)

整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗體

內(nèi)收蛋白抗體

脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體

脂聯(lián)素受體1抗體

腎上腺髓質(zhì)素受體抗體

脂聯(lián)素抗體

腎上腺髓質(zhì)素抗體

腺苷受體A3抗體

ADRA2腎上腺素能受體2抗體

腎上腺素能受體β1抗體


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