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上海酶聯(lián)生物研究所

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技術(shù)文章

現(xiàn)貨代測人白細胞抗原CELISA檢測試劑盒

閱讀：324發(fā)布時間：2014-1-15

本試劑僅供研究使用標本：血清或血漿

試驗原理：

HLA-C試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.ELISA檢測試劑盒已知HLA-C濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將HLA-C和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中HLA-C的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項

試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

使用前，將所有試劑充分混勻。ELISA檢測試劑盒不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應(yīng)。

3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果判斷與分析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的HLA-C標準品濃度為橫坐標（X），ELISA檢測試劑盒做得相應(yīng)的曲線，樣品的HLA-C含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-80IU/L

4、敏感度： 0.1 IU/L

辛基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C標準品 Y38939 20mg 乙基己基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C
氟替卡松丙酸酯相關(guān)物質(zhì)混合物標準品 Y38940 25mg NA
氟替卡松丙酸酯*分離度用混合物標準品 Y38941 25mg NA
醋酸*雜質(zhì)標準品 Y38942 10mg NA
重組蛋白A標準品 Y38943 ea NA
卡巴拉汀酒石酸鹽K-異構(gòu)體 Y38944 20mg NA
群勃龍醋酸酯系統(tǒng)適用性混合物 Y38945 30mg NA
依諾*溶液用于生物測定標準品 Y38946 1ml NA
胺碘酮相關(guān)物質(zhì)E標準品 Amiodarone Related Compound E Y38947 25mg Amiodarone R...
尼泊金甲酯標準品 Methylparaben Y38948 125mg 99-76-3
丙戊酸相關(guān)物質(zhì)A標準品 Y38949 0．25ml 99-67-2
水楊酸相關(guān)物質(zhì)A標準品 Y38950 100mg 9-96-7
丙戊酸標準品 Valproic Acid Y38951 500mg 99-66-1
昂丹司瓊雜質(zhì)D標準品 Y38952 30mg 99614-64-9
昂丹司瓊標準品 Ondansetron Y38953 300mg 99614-02-5
*相關(guān)物質(zhì)B標準品 Y38954 50mg 99469-99-5
鹽酸*標準品 Venlaine Hydrochloride Y38955 100mg 99300-78-4
酒石酸*標準品 Zolpidem Tartrate CIV Y38956 200mg 99294-93-6

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