器具準(zhǔn)備：
1）恒溫震蕩培養(yǎng)箱37℃；
2）高速冷凍離心機及離心管（使用20,000 rpm離心陀）；
3）液態(tài)氮及冰筒；
4）37℃水浴鍋
使用高速離心機要注意： 離心機及離心陀的溫度要預(yù)冷*，相對位置的兩只離心管要平衡好，離心陀轉(zhuǎn)速不能超過zui高速限；
試劑準(zhǔn)備：
1）轉(zhuǎn)型菌株pQG11/M15 [pREP] 單一菌落；
2）LB/amp/kan 及IPTG （1 M stock）；
3）Lysis buffer （50 mM Na3PO4·12H2O, pH 7.0; 0.1 M NaCl; 0.1 mM EDTA; 0.2%Triton X-100）。使用前添加成：10 mM β-mercaptoethanol, 25 μg/mL PMSF, 40 μg/mL lysozyme；
4）Buffer A（50 mM Na3PO4, pH 7.0） 使用前每1 L 添加70 μL β-mercaptoethanol 成為10 mM zui終濃度；
5）Buffer B： Buffer A 再加入0.15 M NaCl；
6）硫酸銨 （要烘干并以研砵磨碎）。
操作步驟：
1） 挑取培養(yǎng)皿上單一菌落，培養(yǎng)在15 mL 的LB/amp/kan 液體培養(yǎng)基中，以120rpm 轉(zhuǎn)速震蕩，在37℃下培養(yǎng)過夜。
2） 取上述菌液6 mL加入300 mL新鮮LB/amp/kan培養(yǎng)基中，以120 rpm 37℃培養(yǎng)至A600 = 0.6 后，加入IPTG成為1 mM濃度，繼續(xù)以120 rpm在37℃震蕩培養(yǎng)4 h。
3） 將菌液倒入50 mL 離心管（conical tube）中離心10 min （5,000 rpm）。
4） 倒去上清，可將菌塊連同離心管置 -20℃冰箱貯存。
5） 取出含菌塊的離心管置碎冰上，待菌塊溶解后，以殘存液體均勻懸濁的。再加入10 mL lysis buffer 輕輕懸浮的。
6） 將菌液放在液態(tài)氮中冷凍1 min，然后在37℃水浴中搖蕩溶解的。如此反復(fù)三次，盡量不要產(chǎn)生大量氣泡。將離心管的內(nèi)容物倒入50 mL 高速離心機的離心管內(nèi)。
7） 離心20 min （12,000 rpm, 4℃） 取上清共 _____ mL,稱為 粗抽取液 （XT）；預(yù)留100 μL 以便日后一起進行分析。此后樣本均得放置碎冰上，以低溫進行實驗。
8） 此上清加入5 mL buffer A 混勻后倒入燒杯，置碎冰上放冷，不時攪拌并緩緩加入固體硫酸銨 _____ gm，使成為70%飽和度，加完后再攪拌10 min。
9） 離心20 min（12,000 rpm, 4℃）后小心倒去上清，取白色沉淀部份。
10） 沉淀加以2 mL buffer B均勻懸濁的，再以桌上型離心機去除不溶物質(zhì)，（10,000 rpm,5 min），共得多少mL，稱為 全蛋白質(zhì)（TP）；預(yù)留100 μL，連同上述XT 置4℃冷藏。
11） 其余溶液部份準(zhǔn)備進行膠體過濾層析，標(biāo)示清楚后需放置4℃進行低溫保存。
