一般培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿的材質(zhì)都是生物相容性的聚苯乙烯，且要求具有較好的光學(xué)性能。在加工成型后，要進行組織培養(yǎng)處理。各公司用的方法都不太一樣，而且這都是諱莫如深的商業(yè)秘密。其實不外乎兩種，一種是物理方法，即使培養(yǎng)細(xì)胞的那個面的粗糙度適合細(xì)胞粘附生長；第二種是化學(xué)方法，用季銨鹽、多肽或者血清、血漿等促進細(xì)胞粘附的物質(zhì)涂覆表面。
在重復(fù)使用培養(yǎng)材料的時候，無論用什么方法洗，都會破壞這層很薄的處理層，使培養(yǎng)材料的生物相容性變差。如果這樣的話，我們冒著培養(yǎng)物被污染的危險，還不如使用玻璃培養(yǎng)瓶呢。
我為什么使用一次性細(xì)菌培養(yǎng)皿呢？其實這是國內(nèi)供應(yīng)商對這種培養(yǎng)皿的一個俗稱，應(yīng)該從字面上翻譯成“一次性使用培養(yǎng)皿”，也就是“Disposable Petri Dish”。這是沒經(jīng)過組織培養(yǎng)處理過的聚苯乙烯培養(yǎng)皿，買回后自己用聚賴氨酸、明膠、血清處理一下，滅菌后使用，效果不比細(xì)胞培養(yǎng)皿差，成本卻低了很多。尤其向大家以色列Mini Plast公司的一次性培養(yǎng)皿，Φ90的才8角錢一個，質(zhì)量，比國產(chǎn)的同樣價格的強許多。
還有，可以買比利時Orange公司的培養(yǎng)瓶，價格只有Coring或Nunc的60%，我使用了一年，效果不比Nunc和Coring的差，而且是經(jīng)過人體工學(xué)處理的，使用起來很順手。
其實DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基的高糖和低糖對細(xì)胞培養(yǎng)影響并不大，我?guī)啄昵皠傞_始做細(xì)胞培養(yǎng)時也常為此困擾。如果為了保險起見，選高糖的好了。培養(yǎng)基中的、丙酮酸鈉濃度更重要，一定注意不同貨號培養(yǎng)基之間的細(xì)小差別，選組分全加入的貨號產(chǎn)品，畢竟省得不少另加試劑的開銷。HEPES的添加也很關(guān)鍵，尤其對代謝旺盛的細(xì)胞更是如此。選血清時，寧可買Hyclone公司的新生牛血清，也不要用國產(chǎn)胎牛血清，切記。經(jīng)濟情況允許，建議用Hyclone的Define級血清，效果太好了。實際上國產(chǎn)胎牛血清都是新生牛，基本上都是病弱新生牛未哺乳前取的血，甚至不如進口新生牛血清，價格卻相差不多。國產(chǎn)血清太“臟”了，其中的內(nèi)毒素、支原體等指標(biāo)都達(dá)不到要求，zui近研究表明，內(nèi)毒素是細(xì)胞凋亡的誘因之一。如果不做細(xì)胞因子和免疫相關(guān)的實驗，建議血清不要滅活，滅活后嚴(yán)重影響細(xì)胞生長速度，且細(xì)胞貼壁率降低。
Gibico的血清很好，我讀碩士時一直用。但是zui近兩年由于瘋牛病的原因（Gibico的血清不都產(chǎn)在美國和澳洲，也有瘋牛病發(fā)生的國家），進口的少，價格也貴。同一價格的前提下，畢竟Hyclone的Define級質(zhì)量更好。Sigma的血清也很好，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比Hyclone的還嚴(yán)格。具體選那種，還得根據(jù)您的工作性質(zhì)而定，畢竟在國內(nèi)科研經(jīng)費有限，除非老板有上千萬的項目，可以不計實驗成本。
關(guān)于血清濃度和是否滅活，取決于您的具體實驗，并沒有嚴(yán)格的規(guī)定。一般原代細(xì)胞培養(yǎng)血清濃度稍高，我用20%，有利于提高細(xì)胞貼壁成活率，尤其是消化分離后沒有培養(yǎng)而直接凍存的細(xì)胞復(fù)蘇，就應(yīng)該加25%血清。
如果做MTT實驗或類似的四唑鹽參與線粒體代謝的實驗，血清濃度盡可能低一些，一般5%-10%，可以減少血清對結(jié)果的干擾，尤其是采用水溶液法（如加10%SDS鹽酸溶解而不用DMSO）時更加重要。如果您做流式細(xì)胞分析，需要分析細(xì)胞周期，要經(jīng)過一個“同步化”過程，有的學(xué)者用血清饑餓法，也就是24小時不加血清，使細(xì)胞周期趨于同步化。
我的細(xì)胞傳代原則：不用EDTA，只用，先用D-hank’s洗掉殘留培養(yǎng)基和血清，然后按1ml/10cm2培養(yǎng)面積加入，鏡下觀察，待到細(xì)胞回縮明顯且尚未脫壁時（這個過程不超過1分鐘），倒掉大部分，只保留細(xì)胞表面被少量濕潤，37度培養(yǎng)箱中放置5-15分鐘，直至細(xì)胞可象流沙狀下滑，加入含血清培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細(xì)胞散開，如有團塊，可考慮200目篩過濾，可不洗滌離心細(xì)胞。此種方法對細(xì)胞傷害zui小，如果做流式細(xì)胞分析，也可用此法，只不過在中加入等量EDTA溶液，出來的峰極規(guī)整漂亮。
某些細(xì)胞只用常規(guī)培養(yǎng)基不行，還必須補充生長因子或特殊量的氨基酸才能正常生長，要多參考相關(guān)文獻。
另外，二氧化碳張力和溫度也很重要，有些細(xì)胞需要較高的二氧化碳濃度或較特殊的溫度。可選用透氣蓋培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿培養(yǎng)板培養(yǎng)。
