愈傷組織的分化

一、目的要求

了解愈傷組織再分化原理，學(xué)習(xí)誘導(dǎo)愈傷組織分化的方法。

二、基本原理

愈傷組織在離體培養(yǎng)過程中，組織和細(xì)胞的潛在發(fā)育能力可以在某種程度上得到表達(dá)，伴隨著反復(fù)的細(xì)胞分裂，又開始新的分化。將脫分化的細(xì)胞團(tuán)或組織經(jīng)重新分化而產(chǎn)生出新的具有特定結(jié)構(gòu)和功能的組織或器官的一種現(xiàn)象，稱為再分化。

在一定的培養(yǎng)條件下，愈傷組織通過分化可以形成苗或根的分生組織甚至是胚狀體，繼而發(fā)育成完整的小植株（圖3－1）。

三、器材
1．材料：
非洲紫蘿蘭葉片愈傷組織，胡蘿卜塊根胚性愈傷組織。
2．實(shí)驗(yàn)用品：
(1) NAA 、BA、瓊脂、蔗糖、2 ,4-D、IBA 等
(2) 分化培養(yǎng)基Ⅰ（生芽）: MS + NAA0.1 mg/L＋BA 1 mg/L＋蔗糖3g/L＋瓊脂0.8g/L，pH 5.8。
(3) 分化培養(yǎng)基Ⅱ（生根）: MS + IBA1 mg/L＋蔗糖3g/L＋瓊脂0.8g/L，pH 5.8。
3．器具：各種接種工具、超凈工作臺。
四、操作步驟
1. 按照培養(yǎng)材料的要求，分別配制誘導(dǎo)愈傷組織生芽培養(yǎng)基或生根培養(yǎng)基。
2. 培養(yǎng)基和接種工具消毒，準(zhǔn)備無菌水和無菌紙。
3. 在酒精燈旁，小心從愈傷組織容器瓶中，挑選出愈傷組織3～5 塊，放置到分化培養(yǎng)基中，蓋上蓋后寫上接種日期、外植體名稱和培養(yǎng)基成分。
4. 在培養(yǎng)室中培養(yǎng)，2 周后統(tǒng)計愈傷組織分化情況。
五、實(shí)驗(yàn)報告
1．記錄胡蘿卜肉質(zhì)根胚性愈傷組織或非洲紫羅蘭葉片愈傷組織，在接入分化培養(yǎng)基培養(yǎng)2 周后新生芽發(fā)生和生長的狀況，計算分化率。
分化率（% ) = （生芽愈傷組織塊數(shù)／接種愈傷組織總塊數(shù)）×100％
2. 記錄愈傷組織培養(yǎng)10 天后，發(fā)生不定根的情況，計算生根率（%):
生根率（% ) =（生根愈傷組織塊數(shù)／接種愈傷組織總塊數(shù)）×