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上海斯邁歐分析儀器有限公司
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以更好的精度、更高的靈敏度和更大的樣品通量進(jìn)行藥物中殘留溶劑的分析
2023-6-1 閱讀(81)
摘要：使用頂空氣相色譜進(jìn)行藥物雜質(zhì)分析的實(shí)驗(yàn)室面臨著以下與儀器相關(guān)的問題：• 頂空分析的面積精度受氣壓變化的影響• 某些低濃度分析物的靈敏度較差• 高沸點(diǎn)雜質(zhì)的存在明顯延長(zhǎng)了每個(gè)樣品的分析時(shí)間，還可能損壞分析柱殘留溶劑測(cè)定是藥物質(zhì)量控制中最常見的頂空氣相色譜應(yīng)用。在本應(yīng)用報(bào)告中，我們未做任何大的改動(dòng)，將已有的 Agilent 6890 GC 分析殘留溶劑的方法轉(zhuǎn)移到新的Agilent 7890A GC 上。對(duì)兩個(gè)系統(tǒng)上所得的結(jié)果進(jìn)行了比較?？傮w上講，Agilent 7890AGC 系統(tǒng)提供了與 Agilent 6890N GC 系統(tǒng)至少相同或更好的性能。結(jié)果還顯示，Agilent 7890A GC 中所運(yùn)用的新技術(shù)可以顯著改善峰面積和保留時(shí)間的重現(xiàn)性和靈敏度，還能明顯縮短整個(gè)分析時(shí)間，從而提高樣品通量和效率。
前言由于許多溶劑對(duì)人類健康構(gòu)成威脅，所以國家和國際法規(guī)機(jī)構(gòu)，如美國食品和藥品管理局（U.S. FDA）、美國藥典（USP)、歐洲藥典（EP），以及國際協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)，都要求對(duì)藥物、賦形劑和最終產(chǎn)品中的殘留溶劑進(jìn)行分析。根據(jù)其可能的危害將溶劑分為三類。1 類溶劑應(yīng)避免，2 類溶劑應(yīng)限制，3 類溶劑被認(rèn)為低毒。目前的趨勢(shì)是從安全角度出發(fā)要降低污染物水平，需要更靈敏而準(zhǔn)確的分析方法。針對(duì)殘留溶劑的 USP<467>新規(guī)范于 2007 年 7 月開始實(shí)施。其目的是最終實(shí)現(xiàn)與 ICH Q3C(R3)相一致，后者也被 EP所采用。對(duì)藥品中殘留溶劑以及對(duì)藥品包裝材料可提取或滲透溶劑的分析，通常采用帶火焰離子化檢測(cè)器（FID）的頂空（HS）GC，或用質(zhì)譜檢測(cè)（MSD）進(jìn)行鑒別和確證。詳見參考文獻(xiàn) 1-3。殘留溶劑分析是藥物質(zhì)量控制中頂空 GC 的最常見應(yīng)用。目前使用頂空 GC 的實(shí)驗(yàn)室可能遇到下列儀器方面的問題：• 由于大氣壓變化影響了頂空氣體采樣閥（GSV）注射樣品的量，頂空分析的面積精度可能受到影響• 對(duì)于某些低濃度分析物，如苯，分析靈敏度較低• 受到后洗脫雜質(zhì)和高沸點(diǎn)溶劑/稀釋劑如沸點(diǎn) 225 oC 的 1，3 二甲基-2 咪唑啉酮（DMI）的影響，樣品分析周期過長(zhǎng)
另外，隨著對(duì)新分析儀器需求的增長(zhǎng)，首要問題是已建立并經(jīng)過驗(yàn)證的方法是否能不用再進(jìn)行方法開發(fā)，不用再進(jìn)行驗(yàn)證或只需稍加驗(yàn)證，即可輕松轉(zhuǎn)移到新一代儀器上。本研究的目的至少是要證明在都不調(diào)節(jié)頂空氣體采樣閥定量管壓力的條件下，HS/7890A GC/FID 與 HS/6890NGC/FID 系統(tǒng)相當(dāng)。但更重要的是，還要說明 7890A GC 中所采用的微板流路控制新技術(shù)、第 5 代氣路系統(tǒng)，以及出色的電子系統(tǒng)，如何有效地解決上述問題，明顯提高峰面積和保留時(shí)間的精度和靈敏度，并通過增加殘留溶劑分析的樣品通量來提高效率。
實(shí)驗(yàn)部分6890N 和 7890A氣相色譜儀GC 均配置安捷倫頂空進(jìn)樣器、揮發(fā)性物質(zhì)接口（VI）和火焰離子 檢 測(cè) 器 （ FID）。 表 1 列 出 了 HS/VI/6890N/FID 和 HS/VI/7890A/FID 系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)條件。7890A 系統(tǒng)在頂空進(jìn)樣定量管上帶反壓調(diào)節(jié)和不帶反壓調(diào)節(jié)的條件下操作，而 6890N 則無反壓調(diào)節(jié)。為了計(jì)算每個(gè)分析物峰面積和保留時(shí)間的重現(xiàn)性（用 %RSD 表示）及統(tǒng)計(jì)的方法檢測(cè)限（MDL），制備了 20 份相同樣品。用 Eppendorf 管吸取 Restek 1 類和 2 類標(biāo)準(zhǔn)品，先用 100 mL 容量瓶配制標(biāo)準(zhǔn)水溶液，然后取 5 mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液，迅速轉(zhuǎn)移到含 3 g 硫酸鈉的 10 mL 頂空樣品瓶中，并立刻加蓋特氟龍密封蓋。然后每管渦旋混合半分鐘。其中 10 份樣品用 6890N 系統(tǒng)，10 份樣品用 7890A 系統(tǒng)分析，兩個(gè)系統(tǒng)的頂空進(jìn)樣定量管上均無壓力控制。頂空平衡后，通過輔助電子流量控制（AUX EPC）模塊對(duì)頂空樣品瓶加壓至14.000 psi， 并 進(jìn) 樣 到 6890N GC 或7890A GC 系統(tǒng)。為消除色譜柱質(zhì)量批間差異的影響，兩個(gè)氣相色譜系統(tǒng)均使用同一根 DB 624 色譜柱進(jìn)行分離。用前述方法制備的另外 20 份樣品也用 7890A 系統(tǒng)
分析，但頂空定量管上不帶反壓調(diào)節(jié)。圖1、2、3 顯示了采用頂空進(jìn)樣定量管壓力調(diào)節(jié)、頂空樣品瓶加壓和反吹的 7890A系統(tǒng)示意圖。頂空平衡后，AUX EPC 通道為頂空樣品瓶加壓至 20.000 psi，用流量控制模塊（PCM）的反壓調(diào)節(jié)通道在5.000 psi 調(diào)節(jié)定量管管。
上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果總結(jié)于表 2。從 1 類和 2類溶劑中選取有代表性的 29 種溶劑，將其結(jié)果列于此表。另外，顯示了所有 29種溶劑的平均值。還進(jìn)行的一系列實(shí)驗(yàn)表明頂空定量管加壓使靈敏度提高。但此時(shí)，不是用 HS 管中含 3 g 硫酸鈉的 5 mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液，而是用 Restek 2B 類標(biāo)準(zhǔn)溶液。用毛細(xì)管虹吸使標(biāo)準(zhǔn)溶液充滿 5 µL 毛細(xì)管，用薄紙小心擦拭毛細(xì)管外壁，快速轉(zhuǎn)移至一個(gè)空的頂空樣品瓶中，并立即加蓋。該步驟消除了制備相同樣品的用戶誤差，確保了精確而重復(fù)的樣品制備。這些系列實(shí)驗(yàn)的結(jié)果如圖 7 所示。圖中的誤差線代表了 95%的置信區(qū)間(±2 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差或sigma)。
最后，對(duì)系統(tǒng)重新配置進(jìn)行柱反吹，快速去除晚洗脫雜質(zhì)或高沸點(diǎn)溶劑或稀釋劑。該 配 置 如 圖 3 所 示 。用 分 流 /不 分 流（S/SL）進(jìn)樣口代替揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)樣口（VI），連接到頂空傳輸管線。VI 配置的0.45 mm 內(nèi)徑柱可能會(huì)限制反吹流速，而S/SL 進(jìn)樣口則沒有這種局限。VI 配置未進(jìn)行反吹檢測(cè)
結(jié)果與討論殘留溶劑的典型色譜圖如圖 4 所示，早洗脫和晚洗脫峰的峰面積和保留時(shí)間重現(xiàn)性如圖 5 所示。以本實(shí)例中的 1,1-二氯乙烯為例，面積精度提高了 3 倍。但對(duì)于某些溶劑如鄰二甲苯，精度提高了 4倍 。 總 之 ， 7890A 系 統(tǒng) 的 性 能 優(yōu) 于6890N 系統(tǒng)
